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用自制药敏试纸进行肉鸡大肠杆菌病的药敏试验
添加时间:2018-05-19

 吴树康1 杨皓2(1.山东省龙口市畜牧兽医工作站;2.中南民族大学生命科学院) 
 一 试验材料和方法 
 1 药敏试纸的制备 
 药敏纸片的制备:取杭州富阳特种纸厂生产的直径18cm的定量滤纸,用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片,取100片圆形纸片放入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎,120℃干燥灭菌2小时备用。 
 药液的制备:按兽药说明书上标明的治疗量比例配制药液。如规格为100g的抗菌物,包装说明兑水200千克,即用天平称药物1g加50mL的灭菌注射水置于灭菌器皿内,充分溶解后吸出1mL置于另一个灭菌容器中,再加入39mL的灭菌注射水。
 药敏纸片的制作:将含有100片纸片的青霉素瓶内加入配置好的药液0.5mL,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,同时在瓶口上记录药物名称,放37℃温箱内过夜,干燥后即密封,切勿受潮,置阴暗干燥处存放备用。 
 2 细菌的分离培养与鉴定 
 细菌的分离培养:采用常规法将细菌病料接种于麦康凯培养基上,37℃培养24小时。挑取单个菌落于普通琼脂平板上进行纯培养,37℃培养24小时。挑取单个菌落进行革兰氏染色、镜检,镜下可见大量散在的红色、中等大小、两端钝圆的无芽孢直杆菌,初步确定为大肠杆菌。 
 生化试验:取待检菌培养物分别接种在蛋白胨水、缓冲蛋白胨水、枸橼酸盐、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素琼脂、三糖铁琼脂、半固体琼脂培养基上,置37℃恒温箱中,培养24小时。结果显示:能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇,产酸。尿素酶试验阴性,不产生H2S,有鞭毛,能运动。符合大肠杆菌的生化特性,证实确为大肠杆菌。 
 3 药敏试验将麦康凯培养基上认定的大肠杆菌菌落,无菌环境下用接种环挑出,均匀涂布在营养琼脂培养基上,同时等距离放置以下药敏纸片:诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、氨苄西林、多粘菌素、头孢曲松、氟苯尼考,置恒温箱中培养24小时,按以下标准判定药物敏感度。 
 二 试验结果 
 药敏试验结果为:本次分离的大肠杆菌对头孢噻肟、氟苯尼考、头孢曲松、多粘菌素高敏以上,对环丙沙星中度敏感,对诺氟沙星和氨苄西林不敏感。 
 三 临诊推广应用 
 根据试验结果,我们对前来就诊的发生肉鸡大肠杆菌病的养殖户进行指导治疗,都受到很好效果。如我市七甲镇姜良宏肉鸡场先后购进两批雏鸡各5000只,第一批鸡20日龄时出现发病,经实验室诊断为大肠杆菌病,按常规用庆大霉素饮水治疗一周后,虽然停止了死亡,但仍有部分肉鸡排稀便,先后死亡500余只,花医药费1000余元。第二批肉鸡于22日龄发病,经实验室诊断仍为大肠杆菌病,通过药敏试验,选用了抑菌效果高敏的氟苯尼考全群拌料治疗,仅3天就将病情基本控制,再无新病例出现,之后继续用药两天,鸡群完全康复。仅死亡雏鸡85只,医药费仅用650元。 
 四 小结与讨论 
 用自制药敏试纸进行药敏试验,能够准确找出病原体的高敏药物,有的放矢地消灭病原体,从而克服了试探性或盲目性用药,减少了损失,提高了禽病的防治效果。 
 自制药敏试纸经济,一方面可以有效地指导养殖户防治禽病,另一方面对本单位的药品经营也有一定的指导作用。 
 影响药敏试验结果的因素有很多,如采集病料的部位、药敏纸片或药物浓度的变化、细菌培养条件是否达标等等,所以试验过程一定要一丝不苟,认真对待,才会有准确的结果。


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